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细胞常用固定剂和固定方法
点击次数:183 发布日期:2018-10-11  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

     培养细胞常用固定剂有4%多聚甲醛磷酸缓冲液、丙酮、甲醇和95%乙醇。在固定之前需用37℃预热的PBS轻洗细胞。

1.4%多聚甲醛磷酸缓冲液 固定10—20分钟,干燥。

2.甲醇 10‰甲醇固定5—20分钟,自然干燥。

3.丙酮 4℃冷丙酮固定组织穿透性和脱水性强,抗原保存好,很少用于组织切片,常用于培养细胞和细胞涂片的固定,平时丙酮4℃低温保存备用,临用时,将载玻片插入冷丙酮内5~10分钟,取出后自然于燥。

4.乙醇 95%乙醇脱水性强,易引起组织收缩、变硬,影响切片质量,因而固定时间不宜过长(2小时内)。乙醇使蛋白变性程度轻,固定后蛋白可再溶解,在染色中孵育时间长的情况下,抗原可流失,并减弱反应强度。

5.乙醚(或三氯甲烷) 与乙醇等量混合对组织穿透性极强,即使涂片上含较多的黏液,固定效果仍较好,是理想的细胞固定液。

培养细胞固定之后晾干可使细胞牢固地黏附在载玻片上,故对于容易脱落的细胞应延长晾干时间。晾干之后PBS漂洗3次,然后进行组织化学或免疫组织化学染色。

来源:上海一研生物科技有限公司
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